Статья находится в Инкубаторе. Она может не соответствовать требованиям к статьям из основного пространства Википедии. Подробнее смотрите в регламенте Инкубатора. Особое внимание нужно обратить на значимость предмета статьи. Если статья на эту тему ранее удалялась по итогу на Википедия:К удалению, вам следует подать заявку на Википедия:К восстановлению. О том, с чего начать написание статьи, можно прочитать в руководстве «Как начать статью». Обсудить статью можно на странице обсуждения статьи. Задать вопросы можно на форуме Инкубатора. Если вам требуется помощь по статье, то добавьте в самом начале своей статьи дополнительную строчку: {{подст:помочь}} Если статья готова, то добавьте в самом начале своей статьи дополнительную строчку: {{подст:проверить}} или в Визуальном редакторе: Вставить — Шаблон — подст:проверить Тогда опытные участники заметят её и ответят на вопросы и/или напишут свои пожелания на странице обсуждения вашей статьи. Готовая статья будет перенесена в основное пространство. В основном пространстве не существует страницы Черновик2. Перейдя по указанной красной ссылке, вы можете посмотреть, не удалялась ли страница с таким названием ранее. Перейдя по данной ссылке, вы можете проверить, нет ли статьи на эту же тему с похожим названием. Этот шаблон ставится на все статьи Инкубатора на всё время пребывания в нём. Пожалуйста, не удаляйте его.

Прошу проверить мою статью на соответствие правилам Википедии В настоящий момент автор завершил работу над статьёй и просит проверить её на предмет соответствия правилам Википедии и её готовность к переносу в основное пространство статей. Дата постановки шаблона — 14 декабря 2024. Обсуждение и высказывание пожеланий по доработке ведётся на странице обсуждения статьи. Внимание: Уважаемый автор, пожалуйста, принимайте участие в обсуждениях по доработке статьи на странице обсуждения статьи. Это поможет установить конструктивный диалог и быстрее закончить работу над статьёй.

Автоматическая проверка статьи выявила некоторые проблемы, они указаны на странице обсуждения. Удалите шаблон {{Инкубатор, автопроверка}} и вставьте {{подст:проверить}}, если хотите, чтобы бот перепроверил статью.

«F-3 Фульвофактор» ^[1] — это сложный экстракт фульвовых кислот, включает в себя одну из самых мощных биохимических формул, отвечает за управление внутри фульвовых и гуминовых кислот, обладает одним из максимально возможных воздействием на биохимические процессы на внутриклеточном уровне. Экстрагируется многоступенчатым способом до окончательного получения формулы биологически активного состава. В природе отвечает за активное противодействие вирусной активности и запуска механизмов апоптоза  отвечающего за уничтожение дефектных (повреждённых, мутантных, инфицированных) клеток. В многоклеточных организмах апоптоз к тому же задействован в процессах дифференциации и морфогенеза, в поддержании клеточного гомеостаза, в обеспечении важных аспектов развития и функционирования иммунной системы. Сложность получения и экстрагирования фракции «F-3 фульвофактор», зависит от качества сырья и технологии получения фульвовых кислот.  При этом, основной проблемой остается не экстракция, а последующая очистка, в частности — разрыв молекулярной связи Fa с Cl, Fе, которые в комплексе с фульвовыми кислотамим образуют токсические дигалоацетонитрилы и имеют свойство накапливаться в организме до достижения критической точки, что в свою очередь приводит к онкологическим заболеваниям.

         Фульвовая кислота состоит из большого количества фракций со своей сложной химической формулой, каждая из которых обладает разнонаправленной выраженной биологической активностью.

         Изучая влияние на РНК вирусы разнофракционных комплексов фульвовых кислот  можно убедиться в биологической активности по отношению к штаммам вирусов, а на следующем этапе необходимо проверить отсутствие токсичности для дальнейшего применения. Для этих целей была задействована система лабораторных исследований  ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора. Дополнительно были исследованы экстракции фульвовых кислот разных фракций для получения сравнительного анализа.

       Были исследовано воздействие на следующие штаммы: гриппа штамм А/California/07/2009 (H1N1), полученный из Государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций и риккетсиозов ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора; также вирус SARS-СoV-2, выделенный в 2020 году в ГНЦ ВБ «Вектор». Противовирусная активность по результатам скрининга препаратов против вируса гриппа АH1N1 и Sars-CoV-2 на культурах клеток MDCK и Vero E6, соответственно более широко представлена на сайте МЕЗОФУЛЬВИК.РФ.

Для соединения «F-3 Фульвофактор» из образцов экстракций фульвовых кислот и соединений (препараты Мезофульвик), показавшего лучший результат по активности в отношении вируса гриппа А, SARS-CoV-2, был более точно определен показатель IC₅₀, он составил 0,998 мкг/мл, а индекс селективности превысил значение 100 (см. Рис 1.)

Рис. 1. Определение активности образца Мезофульвик (F-3 Фульвофактор) в отношении вируса гриппа А.

При исследовании противовирусной активности испытуемых образцов в отношении вируса гриппа А показано, что экстракт фульвовых кислот  «F-3 Фульвофактор»  входящий в состав Мезофульвик, достаточно эффективно ингибирует репликацию вируса в инфицированных клетках.

    Как следует из графика, при повышении концентрации, увеличивается биологическая противовирусная активность (нижняя кривая), при этом токсичность (верхняя кривая) остается на самом низком уровне. Как результат: данный образец не токсичен (TC₅₀> 500 мкг/мл)IC₅₀= 89 мкг/мл.

«F-3 Фульвофактор» входящий в состав функционального концентрата «Мезофульвик», является природным органическим полиэкстрактом фульвовых кислот и действительно обладает высокими биологическими свойствами и качествами фульвовых веществ и не является токсичным при приеме человеком. Что подтверждают лабораторные исследования ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора.

^[2]

В работе использовали:

• вирус гриппа штамм А/California/07/2009 (H1N1), полученный из Государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций и риккетсиозов ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора;

• вирус SARS-СoV-2, выделенный в 2020 году в ГНЦ ВБ «Вектор» из клинического образца инфицированного новым коронавирусом пациента;
• культуральный штамм вируса SARS-СoV-2 был получен в результате инфицирования высоко чувствительной к коронавирусам клеточной культуры VeroE6 [1].

Подлинность используемых вирусных штаммов вирусов гриппа и SARS-СoV-2 были подтверждены ПЦР-анализом и полногенмным секвенированием. Вируссодержащие культуральные жидкости очищали и концентрировали центрифугированием в ячейке с отсекающим фильтром VivaSpin-20 centrifugalfilterunit (100 кДа) (Sartorius, США).

Для культивирования вируса гриппа и вируса SARS-СoV-2 использовали культуру клеток MDCK (клетки почки собаки) и Vero E6 (клетки почки зеленой мартышки), полученные из коллекции культур клеток ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора. Клетки культивировали в 96-луночных культуральных планшетах до формирования полного монослоя в среде DMEM с добавлением 10 % эмбриональной сыворотки телят, 40 ед./мл гентамицина сульфата и 2,5 ед./мл амфотерицина B. Суспензии клеток MDCK и VeroE6 вносили в лунки 96-луночных планшетов в объёме 100 мкл с концентрацией 10⁵ кл./мл среды. После получения монослоя клеток питательную среду из лунок планшетов удаляли и заменяли на равное количество поддерживающей среды без сыворотки, с добавлением 2,5% BSA и 10 мкг/мл ТРСК трипсина.

С целью определения антивирусной активности исследуемых препаратов монослои клеток MDCK и Vero E6 выращенные на 96-х луночных планшетах, инокулировали 3-кратными разведениями исследуемых образцов (два независимых эксперимента, в первой постановке образцы исходно растворяли в культуральной поддерживающей среде — была отмечена неполная растворимость некоторых образцов, во второй в DMSO; 20 мг/мл) в диапазоне концентраций 200-0,27 мкг/мл в культуральной среде. Непосредственно после чего, соответствующие клетки инфицировали одинаковой дозой вируса гриппа А, либо  SARS-СoV-2 (из расфасованного замороженного стока) 10² ТЦД₅₀/лунку (кроме контроля клеток и клеточных монослоев для определения возможной цитотоксичности образцов) по 3 лунки на одно разведение исследуемого образца. В скрининге противовирусной активности препаратов использовали вирусы гриппа и SARS-СoV-2 в дозах, вызывающих 100 %-й цитопатический эффект в лунках с монослоем клеток. Вирусы культивировали в монослое клеток в присутствии испытуемых соединений в течение 3 суток. По истечении этого срока в питательную среду добавляли раствор витального красителя (в тестах активности против вируса гриппа — нейтральный красный[2, 3], в тестах активности против SARS-СoV-2 — МТТ[4, 5]).

После окрашивания клеток питательную среду удаляли из лунок планшетов и лунки двукратно промывали физиологическим раствором, для удаления непоглощённых красителей. В промытые лунки вносили лизирующий раствор: 0,01 М однозамещённый фосфорнокислый аммоний рН 3,5 (50 %) и этиловый спирт (50 %) при окрашивании нейтральным красным[2, 3] или ДМСО [5] при окрашивании МТТ.  По интенсивности полученной окраски — оптической плотности (ОП) судили о количестве жизнеспособных клеток в лунке, которое позволяет оценить токсичность и противовирусную активность испытуемых соединений. Измерение ОП производили на планшетном ридере E-max фирмы Molecular Devices (США) при длине волны 490 нм (при тестировании активности в отношении вируса гриппа) и 540 нм (при тестировании активности в отношении вируса SARS-СoV-2). При помощи компьютерной программы SoftMaxPro-4.0 по показателям ОП рассчитывали 50 %-ю цитоксическую концентрацию (СC₅₀, в мкг/мл) и 50 %-ю ингибирующую концентрацию (IC₅₀, в мкг/мл) испытуемых соединений. СС₅₀ — это концентрация исследуемого вещества в питательной среде, при которой разрушаются (теряют жизнеспособность) 50 % клеток в неинфицированном монослое. IC₅₀ — это концентрация исследуемого вещества в питательной среде, при которой не разрушаются (остаются жизнеспособными) 50 % клеток в инфицированном монослое.

Результаты исследования противовирусной активности испытуемых образцов invitro в отношении вируса гриппа А и SARS-СoV-2, а так же определения их возможной цитотоксичности  представлены в таблице 1. Как видно из представленных результатов ряд образцов проявил достаточно выраженную активность против вируса гриппа А. Эти образцы ингибируют репликацию вируса invitro в концентрациях нескольких микрограмм на миллилитр; IC₅₀ для образцов F-3 фульвофактор, Род-1, F-5 фульвофактор, 3-1 составили 2,10±0,75, 4.97±1,43,4.17±1,25 и 8.43±2,78 мкг/мл, соответственно. Индексы селективности (отношение СC₅₀к IC₅₀) составляют >50, >20,>23и >10, соответственно. Несколько образцов показали меньшую активность в отношении вируса гриппа А, так IC₅₀ для В-1, Л-1 и Экр равнялись 24,19, 31,65 и 22,36 мкг/мл, соответственно.

13 из 29 представленных в таблице 1 образцов (включая все наиболее активные против вируса гриппа А соединения) были тестированы на потенциальную противовирусную активность в отношении вируса Sars-CoV-2. Для 4 из них показана способность ингибировать репликацию Sars-CoV-2 в клеточной культуре VeroE6. IC₅₀  для образцов    F-3 фульвофактор, F-5 фульвофактор, В-1 и Ч-1 от выраженной, до слабо выраженной и соответственно составили 37,55±13,23, 50,15±17,13, 83,30±26,45 и 93,42±30,75 мкг/мл, соответственно. Следует отметить, что образцы F-3 и Ч-1 токсичны для клеток VeroE6 в концентрации 200 мкг/мл. Что свидетельствует о том, что данные соединения способны проявлять определенный уровень противовирусной активности в отношении Sars-CoV-2 лишь в концентрациях близких к цитотоксическим. Образец Род-1 ингибирующий репликацию вируса гриппа А (IC₅₀- 4,97 мкг/мл) токсичен для клеток Vero E6 в концентрации 200 мкг/мл, а в три раза меньшей концентрации  66,7 мкг/мл не оказывает достоверного ингибирующего влияния на репликацию вируса Sars-CoV-2.

Примечания: NA — отсутствие активности в концентрации 100 мкг/мл и меньших (для образцов обладающих цитотоксичностью — отсутствие активности в концентрации в 3 раза меньшей чем цитотоксическая); NT — не тестировано.

При исследовании противовирусной активности испытуемых образцов в отношении вируса гриппа А показано, что соединения F-3 Фульвофактор , Род-1 (Родио́ла ро́зовая (золото́й ко́рень, ро́зовый ко́рень) (лат. Rhodíola rósea), F-5 Фульвофактор, 3-1 достаточно эффективно ингибируют репликацию вируса в инфицированных клетках (IC₅₀ - 2,10±0,75, 4,97±1,43, 4,17±1,25, 8,43±2,78 мкг/мл, соответственно).  Тестирование образцов в отношении вируса Sars-CoV-2 выявило выраженную вирус ингибирующую активность соединений F-3, F-5, В-1 и Ч-1 (IC₅₀ - 37,55±13,23, 50,15±17,13, 83,30±26,45 и 93,42±30,75 мкг/мл, соответственно). Достоверное ингибирующее репликацию вируса Sars-CoV-2 действие указанных образцов проявляется лишь в субтоксических для клеток концентрациях.    

1. Svyatchenko V. A, Nikonov S. D, Mayorov A. P,  Gelfond M. L, Loktev V. B.  Antiviral photodynamic therapy: Inactivation and inhibition of SARS-CoV-2 in vitro using methylene blue and Radachlorin. Photodiagnosis and Photodynamic Therapy.33(2021)102112 (1-5) ^[3]

2. Методические указания МУК 4.2.2136 – 06 Организация и проведение лабораторной диагностики заболеваний, вызванных высоковирулентными штаммами вируса  гриппа птиц типа А (ВГПА), у людей.

3. WHO Manual on Animal Influenza Diagnosis and Surveillance.2002.

4. Кирилюк И. А., Святченко В. А., Морозов Д. А., Казачинская Е. И., Киселев Н. Н., Бакунова С. М., Войнов М. А., Локтев В. Б., Григорьев И. А.  Цитотоксичность нитроксильных радикалов в отношении опухолевых и диплоидных клеток человека invitro и оценка их противовирусной активности. Антибиотикиихимиотерапия, 2012, т. 57, №1-2, с. 3-12).

5. Niks M, Otto M. Towards an optimized MTT assay. J Immunol Methods. 1990130:149-151.

1. ↑ Термин фульвофактор впервые внедрили Грошев Владислав Анатольевич и Агафонов Александр Петрович. Они считают что фульвокислоты и их экстракции обладают разной биологической активностью и разнонаправленным влиянием на внутриклеточную активность, в зависимости от глубины и технологии экстрагирования.
2. ↑ Научные исследования  (рус.). xn--b1afgfkdes9bj4g.xn--p1ai. Дата обращения: 30 марта 2023.
3. ↑ Victor A. Svyatchenko, Sergey D. Nikonov, Alexander P. Mayorov, Mark L. Gelfond, Valery B. Loktev. Antiviral photodynamic therapy: Inactivation and inhibition of SARS-CoV-2 in vitro using methylene blue and Radachlorin (англ.) // Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. — 2021-03-01. — Vol. 33. — P. 102112. — ISSN 1572-1000. — doi:10.1016/j.pdpdt.2020.102112.

3. Грошев В. А., Агафонов А. П., F-3 ФУЛЬВОФАКТОР как наиболее биологически активная фракция фульвовой кислоты — природный противовирусный комплекс. ВСЕРОССИЙСКОЕ ИЗДАНИЕ "ПЕДРАЗВИТИЕ" , http://pedrazvitie.ru/servisy/publik/publ?id=42345

4. Грошев В. А., Святченков В. А. F-3 ФУЛЬВОФАКТОР как управляющая молекула фульвовой кислоты в противовирусной активности. ВСЕРОССИЙСКОЕ ИЗДАНИЕ "ПЕДРАЗВИТИЕ" , http://pedrazvitie.ru/servisy/publik/publ?id=42308.

Категория:Химические_вещества_по_алфавиту Категория:Вирусология